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    1. 重組畢赤酵母表達系統構建

      酵母表達系統包括釀酒酵母表達系統,甲醇酵母表達系統以及其他酵母表達系統。畢赤酵母屬于甲醇營養型酵母,能夠將甲醇作為唯一碳源。畢赤酵母表達系統的優勢如下所述:

      ①擁有目前最強,調控機理最嚴格的啟動子之一醇氧化酶基因AOX1啟動子,非常利于外源基因的表達調控;

      ②具有翻譯后的蛋白加工修飾功能例如磷酸化、糖基化等,是一種不可多得的集聚多種優勢的真核表達系統;

      ③ 既可以在細胞內表達,也可在細胞外表達;

      ④培養基成本低廉,培養條件簡單,生長繁殖速度迅速;

      ⑤外源基因可以單拷貝或者多拷貝的形式在特定的位點整合進酵母染色體上,伴隨著染色體的復制而復制,有較高的遺傳穩定性,同釀酒酵母一樣以穩定的表達菌株存在;

      ⑥可以進行大規模發酵,適合高密度培養,非常適合重組真核蛋白的工業放大化生產制備。

      畢赤酵母宿主菌常用的菌株類型有四種,分別是X33、GS115、KM71H、SMD1163/8。其中X33是野生型菌株,而GS115和KM71H兩種,都具有His4營養缺陷標記。GS115?菌株具有AOX1基因,屬于Mut+,指的是甲醇利用正常型;KM71 H菌株的AOX1位點被ARG4基因插入,屬于Muts,指甲醇利用緩慢型,兩種菌株都適用于一般的酵母轉化方法。SMD116(his4 pep4)屬于蛋白酶缺失型菌株,它能夠表達一些由于蛋白降解而引起的的表達產物分布不均的問題。只是由于SMD116(his4 pep4)菌株生長緩慢,導致表達的外源蛋白質產量低。

      服務內容:
      1、亞克?。簛喛寺≈羶蓚€適當的表達載體中,制備大量質粒,構建線性化載體。
      2、表達條件優化及評估:將線性載體轉化至適合的寄主菌株中,通過PCR方法確定陽性轉化株,表達條件優化及確認–確定培養基及誘導濃度,SDS-PAGE以及Western blot分析。
      3、蛋白表達及純化:少量表達,純度達90%以上。
      服務價格及周期:

      服務編號 服務項目 服務周期
      S2002-1 畢赤酵母表達載體的構建(參見基因克隆部分) 2-3周
      S2002-2 畢赤酵母表達載體轉化到宿主菌 2-4周
      S2002-3 蛋白表達條件的優化 2-3周
      S2002-4 蛋白表達及純化(85%純度的蛋白200ug) 2-3周

      載體選擇:

      編號 載體名稱 載體抗性 表達菌 表達類型
      BCJM-001 pPICzaA 博來霉素 GS115/X33等 誘導表達
      BCJM-002 pPICzA 博來霉素 GS115/X33等 誘導表達
      BCJM-003 其他

      服務承諾:
      1、基因合成和載體構建參見相關服務部分。
      2、本公司會在最短的時間內快速完成實驗,并為客戶提供足量蛋白以滿足科研需求。
      3、提供完整的實驗報告。
      4、提供合乎客戶要求量和純度的特定蛋白。

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