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    1. MTT試驗

      MTT方法簡介:
      四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT方法),是通過快速簡便的顏色反應來檢測細胞存活數量。其原理是MTT可作為哺乳類動物細胞線粒體中琥珀酸脫氫酶的底物。當有活細胞存在時,線粒體內琥珀酸脫氫酶可將淡黃色的MTT還原成藍紫色的針狀甲月替(Formazan)結晶并沉積在細胞中,結晶物能被二甲基亞砜?(DMSO)溶解,用酶聯免疫檢測儀在570nm波長處測定其吸光度OD值,OD值的高低可間接反映活細胞的數量及其活性。

      目前MTT法常用于以下幾個方面的研究:
      ????1、檢測細胞活性:常作為細胞毒性試驗的一種方法。
      2、體外藥物敏感實驗:該方法簡便、經濟、快速,重復性好,所需的細胞數較少,沒有放射性,目前廣泛的用于臨床前的抗癌藥物的篩選研究。
      3、一些細胞因子活性的研究

      主要實驗步驟如下:
      1)將對數生長期細胞用胰酶消化后配制成濃度為1-10×104個/ml的細胞懸液,按1000-10000個細胞/孔接種于96孔板,每孔加100μl。
      2)將平板置37℃、?5%CO2濕度培養箱中24小時后,加入含有不同濃度受試樣本的培養液100μl,每個樣本不同濃度設平行的三個孔,對照組加不含樣本的培養液100μl,再放入培養箱中孵育24-72?小時,
      3)用快速翻板法倒掉培養液,每孔加入用無血清1640按5mg/ml新鮮配制的MTT溶液100μl,溫育4小時,使MTT還原為甲?月替,再次倒掉上清液,每孔加DMSO(二甲基亞楓)200μl,用平板搖床搖勻后,使用酶標儀測定光密度值(OD)(參考波長450nm,檢測波長570nm),以溶劑對照處理細胞為對照組,按下述公式計算化合物對細胞的抑制率,并按中效方程計算半數抑制濃度IC50:

      客戶提供:
      樣本描述,相關的實驗設計內容如作用時間和樣本濃度等。

      公司提供:
      實驗結果,IC50值。

      實驗周期與費用:
      實驗費用以樣本數和細胞株的種類數目為單位計算,實驗周期為21個工作日,公司將在材料和預付的實驗經費全部到位的后30個工作日之內提交實驗結果??蛻粜柙谑盏綄嶒灲Y果后一周內付清所有剩余款項。

      收費標準:

      每塊96孔板(每個樣本,1株細胞的IC50值) 500元。

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