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    1. CRISPR/CAS9載體構建

      服務價格及周期

      服務編號 服務內容 服務價格 服務周期
      CRI-001 CRISPR/Cas9載體構建(常規系統) 600 3-4周
      CRI-002 CRISPR/Cas9載體構建(雙切口系統) 1200 3-4周
      CRI-003 CRISPR/Cas9共轉系統(sgRNA與Cas9整合) 3000 4-6周
      CRI-004 CRISPR/Cas9腺病毒載體構建 800 4-6周
      CRI-005 CRISPR/Cas9載體活性檢測 2000 2-3周

      服務簡介
      規律間隔成簇短回文重復序列(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats, CRISPR)本身是一種防御系統,用以保護細菌和古細菌細胞不受病毒的侵害。在這些生物基因組中的CRISPR位點能表達與入侵病毒基因組序列相匹配的小分子RNA 。當微生物感染了這些病毒中的一種,CRISPR RNA就能通過互補序列結合病毒基因組,并表達CRISPR相關酶,也就是Cas,這些酶都是核酸酶,能切割病毒DNA ,阻止病毒完成其功能。
      CRISPR/casp9

      Cas9酶受sgRNA引導靶向切割DNA雙鏈的分子機制

      該切割DNA的機制與2012年被證實廣泛適用于真核生物,從而引發了后續的以CRISPR/Cas9為基礎的第三代基因編輯工具的研究熱潮。在真核細胞中雙鏈的DNA打斷(Double strand break, DSB)可以引發兩種修復機制,其中非同源末端結合(Non-homologous end joining, NHEJ)可以產生數個堿基的隨機刪除或插入,從而引發移碼突變,這便是基因編輯工具進行基因敲除的原理;此外在有同源序列存在時可以進行同源重組修復,該機制可以實現外源基因的敲入或者定點修飾。

      CRISPR/Cas9技術特點

      相比前兩代基因編輯工具ZFN系統和TALEN系統,其優點顯著:

      首先,CRISPR-Cas9系統的可用位置更多。理論上基因組中每8個堿基就能找到一個可以用CRISPR-Cas9進行編輯的位置,可以說這一技術能對任一基因進行操作,而TALEN和ZFN系統則在數百甚至上千個堿基中才能找到一個可用位點,這大大限制了使用范圍。

      其次,Cas9擴展性強,正如本公司使用的Cas9n,是一種只進行單鏈切割的Cas9突變型,該酶可以大大降低切開雙鏈后帶來的非同源末端連接造成的染色體變異風險。此外還可以將Cas9蛋白連接其他功能蛋白,來在特定DNA序列上研究這些蛋白對細胞的影響。

      第三,更為重要的是,CRISPR-Cas9系統的使用極為方便,只需要替換一段核酸序列,幾乎任何實驗室都可以開展工作。

      CRISPR/Cas9載體構建服務優勢

      • 本公司提供的質粒均來源于最新的頂尖雜志中已使用過的系統,其有效性已被反復被驗證。
      • 靶點的篩選: 不同靶點的有效性存在差異,本公司免費為您設計三個特異性靶點。
      • 載體系統的構建:腺病毒CRISPR系統、雙切口CRISPR系統、lentiCRISPR系統、常規CRISPR系統等,根據客戶的不同需要,提供個性化載體構建服務。

      客戶須知

      1. 客戶可根據后續實驗需求選擇合適的系統進行CRISPR/Cas9載體定制服務。
      2. 客戶需要提供外顯子序列或者基因登陸號。

      CRISPR gRNA 載體

      載體名稱 gRNA啟動子 All-in-one vector? 選擇標記
      pSpCas9 BB-2A-GFP (PX458) U6 是,CBh啟動子啟動Cas9表達,N端含DYK& NLS AmpR,GFP
      pLentiCRISPR v2 U6 是,EFS啟動子啟動Cas9表達,C端帶DYK AmpR, PuroR, BleoR
      pLentiGuide-Puro U6 否,pLentiCas9-Blast載體免費提供,以用于共表達 AmpR, PuroR

      服務承諾

      1. 以上服務價格均為針對單個靶點設計的CRISPR/Cas9系統,并不保證所選靶點的切割效率,建議同時購買三個靶點以篩選出最優靶點;
      2. 提交的結果包含第三方測序報告,序列準確無誤,確認提供的質粒和第三方測序結果一致;
      3. 利用熒光顯微鏡來檢測CRISPR/Cas9載體活性,細胞熒光表達情況的強弱可以反應靶點的有效性。

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