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    1. 重組腺病毒包裝服務

      腺病毒(Adenovirus, ADV)是一種無包膜的線性雙鏈DNA病毒,具有廣泛的細胞和組織感染能力。感染過程劇烈,適于短時間內進行基因高表達的實驗,與其它病毒相比,腺病毒優勢在于插入片段較長,表達活性強。

      重組腺病毒包裝是以Ad5血清型E1/E3缺陷型腺病毒DNA為骨架,在克隆,包裝,擴增等各步條件做了改進和優化,達到了克隆陽性率更高,質量更可靠,包裝穩定,出毒迅速,滴度高等效果。在此基礎上,還拓展了更廣泛的應用,可以提供各種帶報告基因的,帶不同標簽的腺病毒構建和包裝服務。所包裝的腺病毒已成功應用于信號轉導,基因轉位,Co-IP,干細胞研究等科研實驗。并且可以完成較高難度的克隆構建,包括具有細胞毒性作用基因的腺病毒構建,在短時間內完成從原始質粒到病毒DNA的構建工作。

      體外應用時,腺病毒載體轉基因效率高(接近100%的轉導效率),且可轉導不同類型的細胞,對于大量難轉染細胞的基因遞送是一個很好的工具。但是,在體內應用時,由于腺病毒免疫原性強,感染劇烈,故常會引起動物局部組織炎癥反應和機體免疫反應,對動物體征和實驗結果的客觀性造成影響。

      腺病毒包裝與純化

      由于腺病毒骨架載體比較大(~30kb),而且載體中的一些常用酶切位點幾乎都有多個,如果用常規的酶切-連接的方式將外源基因或者shRNA表達框構建至腺病毒骨架載體上,成功率很低,因此,腺病毒表達系統基本上都是用同源重組的方法將外源基因或shRNA表達框構建至腺病毒骨架載體上。

      腺病毒包裝骨架達質粒與穿梭質粒共轉染HEK-293細胞,待細胞出現CPE狀態后通過收集細胞上清和細胞裂解物,通過濃縮或氯化銫密度梯度離心純化病毒。?CPE(Cytopathic Effect):病毒對組織培養細胞侵染后產生的細胞變性,利用此種病變效應可進行病毒定量。

      腺病毒載體優勢

      腺病毒(Adenovirus)是最高效可靠的重組病毒表達系統之一,可用于在哺乳細胞中瞬時及高水平地表達shRNA或目的蛋白。

      其具備以下優點:

      1. 宿主范圍廣。腺病毒可感染一系列哺乳動物細胞,除可感染幾乎所有人的細胞類型外,還可感染包括大鼠、小鼠、兔、豬、羊、猴、雞等物種。
      2. 因腺病毒的感染不依賴細胞周期,故其既可以感染增殖細胞也可以感染非增殖細胞。
      3. 腺病毒具有嗜上皮細胞特性,因大多數腫瘤細胞均屬于上皮細胞,這使得腺病毒非常適合應用于基因治療領域。
      4. 病毒滴度高,可用于動物水平的實驗。
      5. 有較好的生物安全性。腺病毒攜帶的基因不會整合到宿主細胞基因組中;實驗中雖然會有一定機率出現RCA(即復制型腺病毒),但由于大多數成人體內都有針對腺病毒的抗體,所以一般危害不大。

      重組腺病毒、腺相關病毒和慢病毒比較

      載體選擇

      以下腺病毒載體可供您選擇:

      服務價格:

      客戶須知:

      1、? 本服務是基于客戶提供構建好了穿梭載體的基礎上的價格,如果需要進行腺病毒載體的構建:價格參見載體構建部分。

      2、? 腺病毒的感染依賴于細胞表面的柯薩奇-腺病毒受體(CAR),雖然其可以感染多種宿主及大量的細胞株/系,仍有少量細胞因其表達不帶該受體而無法進行有效感染,客戶在確定是否采用重組腺病毒之前請先通過閱讀文獻或是預實驗來確定實驗的目標細胞可被腺病毒感染。

      3、? 如客戶所需包裝的目的基因或shRNA序列片段由客戶提供,則客戶應提供所要構建腺病毒的目的基因/shRNA的序列及其它相關說明信息??蛻魬獙λ峁┑牟牧霞靶畔⒇撠?,如因客戶提供的材料及信息不準確而引起的實驗延誤或經濟損失由客戶承擔。

      4、?若包裝的重組腺病毒用于表達shRNA,可直接購買本公司shRNA真核表達載體構建的shRNA表達質粒作為穿梭載體,直接包裝腺病毒,特別適用于質粒轉染效率較低的目的細胞。

      服務承諾:

      1、? 提供腺病毒包裝、擴增,純化,滴定。如果需要提供腺病毒載體的構建,將目的基因片段克隆到腺病毒載體上,參見相關部分。

      2、? 默認情況下本公司提供的病毒量為200ulx5支,滴度為1×1010pfu/ml ~2×1010pfu/ml(部分病毒可能因其插入片段本身的毒副作用而對重組腺病毒的滴度有所影響)。

      3、? 提供完整的實驗報告、測序報告。

       

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