<source id="4q8pq"></source>

<b id="4q8pq"></b>

    <samp id="4q8pq"><td id="4q8pq"></td></samp>
    1. 2× qPCR Master Mix(Probe Method)

      貨號:A103-5

      規格:500rxn(1.0 ml×5支)

      保存:-20℃避光保存兩年

      【產品概述】

      本產品是采用探針法進行Real Time PCR(qPCR)檢測的試劑。核心組分是基于化學法修飾的熱啟動DNA聚合酶,配合針對qPCR優化的反應緩沖液,實現了對PCR抑制物耐受性高、擴增特異性高、擴增效率高、檢測靈敏度高等特點。本產品是2×濃度的Premix型試劑,配制qPCR反應體系十分簡便。同時,本產品使用UDG酶和dUTP有效防止PCR產物的交叉污染,數據更準確。使用時只需加入模板、引物、探針和水,使其工作濃度為1×,即可進行反應。此外,本產品適用于快速PCR,可以在寬廣的動態范圍內對靶基因進行準確定量,檢測重復性好,可進行可信度高的Real Time PCR分析。

      本品特點:使用化學法修飾的熱啟動酶,提高靈敏度,增強特異性;使用dUTP和UDG酶,可有效排除先前擴增產物的交叉污染,數據更準確;針對qPCR優化的反應緩沖液,增強特異性,減少引物二聚體形成,提高擴增效率,重復性好,可信度高。

      本品不含有用以校準孔間熒光信號差異的ROX Reference Dye,適用于Bio-Rad iCycler CFX96,CFX384,iQ,iQ5,MyiQ,Opticon, Opticon 2,MiniOpticon,Chromo4,Qiagen Corbett Rotor-Gene Q,Rotor-Gene 3000,Rotor-Gene 6000,Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2s,Roche Applied Science LightCycler 480,Thermo Scientific PikoReal Cycler,Illumina Eco qPCR,Cepheid SmartCycler,Takara TP-800等機型。以下機型:Applied Biosystems 7000,7300,7700,7900,7900HT,7900HT Fast;StepOne,StepOnePlus等需要添加高濃度ROX Reference Dye。這些機型:Applied Biosystems 7500,7500 Fast,ViiA7;Stratagene MX3000P,MX3005P,MX4000等需要添加低濃度ROX Reference Dye。

      【推薦qPCR反應體系(以20 μl體系為例)】

      Component Volume Final ?Concentration
      2×qPCR Master Mix(Probe Method) 10 μl
      10 μM Forward Primer 0.4 μl 0.2 μM
      10 μM Reverse Primer 0.4 μl 0.2 μM
      10 μM Probe 0.4 μl 0.2 μM
      PCR-grade Water Variable
      Template Variable As Required
      Total Volume 20 μl

      反應體系中各成分的量可根據以下原則進行調整:

      反應體系中引物終濃度為0.2μM即可得到較好的擴增效果。當反應性能較差時,引物終濃度可以在0.1 -0.5 μM范圍內進行調整;qPCR靈敏度極高,建立反應體系時加入模板量的準確度對最終結果會有很大的影響。推薦將模板稀釋后加入反應體系中,這樣可以有效提高實驗的重復性;如模板為未稀釋cDNA原液,使用體積不應超過qPCR反應總體積的1/10。

      【PCR反應條件】

      Step Temperature Duration Cycles
      UDG pre-treatment 25℃ 3 min 1
      Enzyme activation 94℃ 10 min 1
      Initial Denaturation 94℃ 3 min 1
      Denaturation 94℃ 10 sec 40-45
      Annealing/Extensiona 60℃ 30 sec
      • 退火/延伸溫度根據不同的引物和探針需要進行優化,推薦優化的溫度范圍為58℃-65℃。退火/延伸時間請根據您使用的Real-time PCR儀所需要的數據采集最短時間限制自行調整:使用ABI 7700和7900時至少30秒;使用ABI 7000、7300和 7500時34秒。

      【注意事項】

      • 盡量避免反復凍融,以免酶活下降。如每次使用量較少,推薦分裝后保存
      • 使用前請上下顛倒混勻預混液,預混液經混勻瞬時離心后即可使用
      • qPCR Master Mix(Probe Method)于-20℃保存時,有時會形成沉淀。在室溫短時間放置后,渦旋混勻即可完全溶解。確保試劑混合均勻后再使用
      • 由于本品檢測靈敏度極高,在配制過程中請使用干凈滅菌槍頭、反應管,條件容許的實驗室推薦使用專用的移液器,避免污染

      【常見問題與解決方案】

      1、陰性對照中有信號產生:

      模板或試劑被核酸污染:在進行PCR反應前采取標準的預防措施,以降低污染風險

      2、定量PCR無擴增曲線:

      • 確認程序中是否設置了信號采集步驟:兩步法擴增程序將信號采集設置在退火延伸階段
      • 確認引物是否降解:長時間未使用的引物可能發生降解,合成新的引物,重復實驗
      • 模板濃度太低或降解:減少稀釋度,一般未知濃度的樣品按最高濃度進行檢測

      3、定量PCR擴增曲線不平滑:

      • 信號太弱:提高探針濃度或者優化探針濃度
      • 定量PCR反應過程中體積變化:PCR管未蓋嚴導致反應體系蒸發

      【備注】

      本產品僅供科研使用。在確認產品質量出現問題時,本公司承諾為客戶免費更換等量的合格產品。 在所有情況下,本公司對此產品所承擔的責任,僅限于此產品的價值本身。

      發表評論

      Your email address will not be published. Required fields are marked *

      熟妇人妻中文字幕无码老熟妇_久久久久人妻一区精品免费看_无码精品人妻一区二区三区九厂_特级做A爰片毛片免费看在线
      <source id="4q8pq"></source>

      <b id="4q8pq"></b>

      <samp id="4q8pq"><td id="4q8pq"></td></samp>